Nga take wawao i roto i nga tauhohenga PCR

I te tauhohenga PCR, he maha nga ahuatanga e pa ana ki te wawao.
Na te mea ko te tino nui o te PCr, ka kiia ko te poke, ka kiia ko tetahi o nga mea nui e pa ana ki nga hua PCR ka taea te whakaputa hua pai.
He rite tonu te whakapae ko nga momo puna e arahi ana ki nga hua kino-kino. Mena he waahanga nui ake ranei o te ranunga PCR, ko te tau whakatuatanga ranei e aukati ana, ka raru ranei, ka taea te aukati i te Diagnonic. Ka taea e tenei te arahi ki te whakaheke i te whai hua me nga hua kino kino.
I tua atu ki te aukati, ko te ngaro o te pono o te waikawa o te tarukino ka puta mai na te tuku me te / ranei nga tikanga rokiroki i mua i te whakarite tauira. Ina koa, ko te pāmahana nui, te koretake ranei te rokiroki, ko te kino pea o nga pūtau me nga waikawa kūno. Ko te whakatikatika i te pūtau me te kiko o te kiko me te whakakao paraffin e mohiotia ana ko nga kohinga DNA me te raru tonu (tirohia te ahua 1 me te 2). I roto i enei keehi, ko te wehenga tino pai me te purenga kaore e awhina.

Whakaahua 1 | Tuhinga o mua
I whakaatu a Agarose Gel ilectrophoresis ko te kounga o te DNA i wehea mai i nga waahanga o te paraffin o nga autopities he rereke te rereke. Ko te DNA o nga wehenga rereke he roa te roa i roto i nga waahanga taapiri i runga i te tikanga whakatika. I tiakina te DNA anake i te wa i whakaritea i roto i nga tauira matatini taketake me te mea i roto i nga hononga kore. Ko te whakamahinga o te buin tino waikawa, kaore ranei i te koretake, i puta ai te ahua o te waikawa-waikawa ki te DNA. Ko te toenga toenga ka tino pakaru.
Kei te taha maui, ka puta te roa o nga mongamonga i roto i nga kilobose (KBP)

Whakaahua 2 | Te ngaro o te pono o nga whaainga waikawa o te waikawa
(a) Ko te āputa o te 3'-5 'i runga i nga whenu e rua ka pakaru i te DNA whaainga. Ko te whakahiato o te DNA ka puta tonu i runga i te kongakonga iti. Heoi, ki te mea kei te ngaro te papanga a te tuatahi ki te kongakonga a te DNA, ka puta noa te whakanuinga raina. I roto i te keehi tino manakohia, ka taea e nga kongakonga te whakahoki ano tetahi ki tetahi, engari ko nga hua ka iti, ka iti iho i nga taumata kitenga.
(b) Te ngaro o nga turanga, na te mea ko te whakarereketanga me te hanga o te hymidine, ka heke ki te maha o nga h-herena me te whakaheke i te TM. I te wa o te wa whakamahana, ka rewa te tuatahi mai i te DNA Matrix kaore e taea e ia te iti ake i raro i nga tikanga iti.
(c) Ko nga turanga o te basmine tata te hanga i te tt.
Ko tetahi atu raru e pa ana ki nga tohu whakaari ngota ko te tuku-tino pai o te waikawa karihi ki te tango i te tangohanga Phenol-chloroform. I roto i nga keehi tino, ka taea te hono atu ki nga kino teka. He nui te wa ka ora ma te kohua lysis, te whakakotahitanga o nga otaota pūtau, engari ko tenei tikanga ka puta he iti te mate PCR i te kore e tukuna te waikawa NCLECIC.

Te aukati i nga mahi polymerrase i te wa i Charification

I roto i te katoa, ko te aukati e whakamahia ana hei kaupapa ipu hei whakaahua i nga mea katoa e arahi ana ki nga hua o Substal. I roto i te tikanga koiora, ko te aukati he iti noa ki te ngohe o te enzyme, ara, ka whakaiti, ka aukati i te hurihanga huanga-hua ranei (hei tauira, Mg2 + mo Taq DNA Polymerase).
Ko nga waahanga kei roto i te tauira, he maha ranei nga whiu me nga tangohanga ka taea te aukati i nga hua egnzent, ma te neke ranei i nga hua o te polymete.
Heoi, he maha nga taunekeneke i waenga i nga waahanga o te tauhohenga me te whaainga-waikawa kei roto i nga waikawa karihi ka tohua ano hei 'pcr heahi'. Ka mutu te pono o te pūtau ka tukuna e te haangai me te waikawa o te waikawa i waenga i te tauira me ona otinga me te waahanga totoka. Hei tauira, ko te 'Scavengers' ka taea te here - te rua-rua ranei i roto i nga taunekeneke kore-hanga me te pureru ma te whakaiti i te maha o nga whaainga tae atu ki te kaipuke tauhohenga PCR.
I roto i te katoa, ko nga kainoho PCR kei roto i te nuinga o nga mate tinana me nga reeti i whakamahia hei mimi, he komoglobin me te heparin, te momona, te ngako, te hinu) me nga waahanga.

Ka taea te kitea i nga kainoho o te huakita me nga pūtau eukaryotic, te DNA-herea i te miihini-kore-a-rorohiko o te papamahi kiko me nga taputapu papaa. Te purenga o te waikawa o te waikawa i te wa i muri mai ranei i muri i te tangohanga ko te tikanga pai ake mo te tango i nga kaimukoro PCR.
I tenei ra, he maha nga taputapu tangohanga aunoa ka taea te whakakapi i nga kawa a-ringa, engari ko te whakaora 100% me te / te pure i nga whaainga kaore ano kia whakatutukihia. Ka taea tonu e nga kainoho ka taea te noho i roto i nga waikawa karihi ma, kua oti kē te whai hua. Ko nga rautaki rereke e noho ana hei whakaiti i te paanga o nga kaiurungi. Ko te kowhiringa o te Polymerrase e tika ana ka whai paanga nui ki te mahi whakauru. Ko etahi atu tikanga i whakamatauhia hei whakaiti i te aukati PCR kei te piki haere te kukume polymerral ranei te tono taapiri penei i te BSA.
Ko te aukati i te urupare PCR ka taea te whakaatu ma te whakamahi i te mana kounga o roto (IPC).
Me matua tupato te tango i nga rehitatanga katoa me etahi atu rongoā i roto i te kete tangohanga, penei i te ethanol, edta, guscn, guscn, sds, isopropanol me te hiwi horoi. I runga i o raatau kukume, ka taea pea e ratou te whakahohe, te aukati ranei i te PCR.